產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :小鼠骨髓造血干細胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :骨髓組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠骨髓造血干細胞分離自骨髓。骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等。某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。
骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞,最終生成各種血細胞成分,包括紅細胞,白細胞和血小板。
造血干細胞需要根據(jù)機體的生理需求適時的補充血液系統(tǒng)各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下,造血干細胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個細胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中,造血干細胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病,在其它實體瘤的治療中,比如淋巴瘤,生殖細胞瘤,乳腺癌,小細胞肺癌,主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。
造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖,一個干細胞分裂產(chǎn)生兩個子細胞,一個分化為造血祖細胞,另一個則保持干細胞特征。造血干細胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細胞同時,保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,造血干細胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細胞滋養(yǎng)(滋養(yǎng)層細胞), 缺少滋養(yǎng)層細胞不增殖,無法長期培養(yǎng),本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細胞灌裝發(fā)貨,不包含滋養(yǎng)層,因此收貨后建議盡快實驗。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠骨髓造血干細胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠骨髓造血干細胞經(jīng)C D 34、Sca-1免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :懸浮
細胞形態(tài) :圓形
傳代特性 :不建議傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠骨髓造血干細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠骨髓造血干細胞是一種懸浮細胞,細胞形態(tài)呈圓形,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細胞不建議傳代。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 懸浮細胞處理
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中,用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液。
2) 1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細胞沉淀。
3) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞。將分散好的細胞調(diào)整合適
密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 若遇到懸浮細胞團塊較大,無法機械吹散時,向步驟2) 中細胞沉淀添加0. 25% 胰蛋白酶消化液2m L至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰酶抑制劑(或血清) 終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細胞。1200rpm 離心5min,棄上清,收集細胞沉淀。
5) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻。按傳代比例進行接種傳代,然后補充
新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 此細胞為懸浮細胞,請注意不要直接倒掉,造成損失。懸浮細胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時,請注意懸液中細胞是否收集完全,可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5m in,增加細胞獲取量。為維持細胞干性,發(fā)貨細胞瓶內(nèi)只灌裝1/3-1/2液體,請注意并非漏液。