產品簡介
產品名稱 :小鼠神經少突膠質前體細胞
產品品牌 :通蔚生物
組織來源 :腦組織
產品規格 :5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
小鼠神經少突膠質前體細胞分離自腦皮層組織。大腦分左右兩個半球,大腦皮質(灰質) 覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經系統,在銀浸染標本中,少突膠質細胞比星狀膠質細胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。
少突膠質細胞(oligodendrocyte) 是中樞神經系統(C N S) 的成髓鞘神經膠質細胞,其發育要經歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型。但是,細胞發育是一個連續的過程,其形態、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限,因此,其分類是相對的。
這三型分別為:Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O 2A (pre-O 2A p ro genitorcell) 。細胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養時成簇生長在星形膠質表面,具有很強的分裂增殖潛力,表達神經節苷脂GM 1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子(polysialic acid -neuralcellad h esionmolecule,P SA-NCAM ) 等。
Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起,極少數為單極突起,直徑約7μm ,有一定的分裂增殖能力。體外培養時為雙潛能細胞,既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質,故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞(oligo d en d ro cyte-typ e-2astro cyte p ro genitorcell,O 2A) 。O 2A除表達G M 1和波形蛋白外還表達神經節苷脂G D 3和G Q(淋巴雜交瘤株A 2B5產生G Q 的抗體) ,故常用A 2B5抗體標記O 2A 。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細胞。
直徑約10μm 。根據其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的O L胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A 2B5標記物,同時也表達O 1-O 4抗原,無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網,大量表達半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,G C ) 、蛋白脂蛋白(proteiolipidprotein,PLP) 、髓鞘堿性蛋白(m yelin basic protein,M BP) 等,有對軸突髓鞘化的能力。體外培養的少突膠質細胞前體細胞(簡稱少突膠質細胞前體細胞) 包括前O 2A 和O 2A 和未成熟少突膠質細胞,前兩者具有增殖能力。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠神經少突膠質細胞采用胰蛋白酶消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠神經少突膠質前體細胞經A2B5免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml)
培 養 基 :含B-27 Supplem ent、PD G F、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2天半量換液1次
生長特性 :貼壁
細胞形態 :雙極、多極形
傳代特性 :不傳代,不增值,存活1-2周
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠神經少突膠質前體細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
小鼠神經少突膠質前體細胞是一種貼壁細胞,細胞形態呈雙極、多極形,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞不傳代,不增值,存活1-2周。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入3-5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,調整合適密度按實驗需求接種對應實驗器皿,然后按器皿大小補充適當新鮮的完全培養基,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后,培養觀察,用于實驗。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。