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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 大鼠胚胎干細胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 囊胚
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
大鼠胚胎干細胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細胞(Em bryonic stem cell，ESC s，簡稱ES、E K 或E SC 細胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來的一類細胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細胞都能被誘導分化為機體幾乎所有的細胞類型。進一步說，胚胎干細胞(ES細胞)是一種高度未分化細胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細胞。
ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時，細胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。細胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細胞彼此界限不清，細胞表面有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細胞的直徑7微米～18 微米，豬、牛、羊ES細胞的顏色較深，直徑12微米～18微米。
胚胎干細胞與普通細胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specificem bryonic antigen s,SSE A )，人類胚胎干細胞還帶有高分子量的糖蛋白T R A 1-60、T R A -1-81等標志，這些特性和標志均可以用于對胚胎干細胞進行鑒定，除此之外，胚胎干細胞還可以在體外永久傳代，并保持正常核型。
在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因(Leukaemiainhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層(M EF)上培養(yǎng)時，胚胎干細胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明 端粒酶與細胞衰老密切相關，多數(shù)成熟細胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細胞與成熟細胞不同的重要特點，也可能是其復制生命期限遠比體細胞長的原因。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠胚胎干細胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，胰酶消化傳代純化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠胚胎干細胞經(jīng)O ct-4免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 明膠(0.1%)
培 養(yǎng) 基 ： 含LIF、BM P、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 短梭形、多角形
傳代特性 ： 可傳3-5代左右
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.025% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠胚胎干細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
大鼠胚胎干細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈短梭形、多角形，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳3-5代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2.貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
