產品簡介
產品名稱 :大鼠胚胎肢芽間充質干細胞
產品品牌 :通蔚生物
組織來源 :胚胎
產品規格 :5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
大鼠胚胎肢芽間充質干細胞分離自胚胎肢芽;胚胎肢芽存在于兩棲類以上的大多數脊椎動物胚胎中,在四肢發生的初期階段,在身體兩側有呈芽狀的突起,內部是中胚層側板的體壁板垱厚形成,表面有表皮覆蓋。在這個中胚層區肢芽迅速伸長,不久,在其前端即見有指的突起。在此時期間,其內部的中胚層分化成軟骨、肌肉等。
這些分化組織,在將肢芽作分離培養的時候也可以獲得。根據對兩棲類的有尾類的研究,作為肢原基各部的胚發能力,肢芽物質的大部分是位于背半部,而前半部主要參與基部形成,后半部參與前端的形成。在實驗上,即使將肢的原基分成二半,每一半調整好都可形成基本上近于正常形態的肢體,而且肢體各軸的極性和側性也逐漸決定。
間充質干細胞(M SC )是屬于中胚層的一類多能干細胞,主要存在于結締組織和器官間質中,是具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量,并在特定條件下轉變成為一種或多種構成人體組織或器官的細胞,從而在組織修復等方面發揮積極作用。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠胚胎肢芽間充質干細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法制備而來制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠胚胎肢芽間充質干細胞經C D 90免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 :含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁 細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 :可傳3-5代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0.25% 胰蛋白酶
培養條件 :氣相:空氣,95% ;C O2,5%
大鼠胚胎肢芽間充質干細胞體外培養周期有限;建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
大鼠胚胎肢芽間充質干細胞是一種貼壁細胞,細胞形態呈成纖維細胞樣,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞可傳3-5代左右;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2.貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后,培養觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1m g/m l),明膠(0.1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。