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產(chǎn)品中心

  • 小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞

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    價(jià)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW33740
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡介
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞分離腦組織。多巴胺神經(jīng)元,即:胺能神經(jīng)元,主要指含多巴胺的神經(jīng)元,其細(xì)胞體主要分布在黑質(zhì)、腳間核和丘腦下部等處。在這些區(qū)域多巴胺含量很高。多巴胺在機(jī)體內(nèi)合成時(shí)以酪氨酸為原料。腦內(nèi)的多巴胺主要是由黑質(zhì)細(xì)胞來合成,這些多巴胺參與錐體外系統(tǒng)的活動(dòng),與軀體運(yùn)動(dòng)機(jī)能有密切關(guān)系。
腦內(nèi)多巴胺代謝失常時(shí),可引起震顫性麻痹(帕金森震顫) 。多巴胺(D opamine) ,是N A 的前體物質(zhì),是下丘腦和腦垂體腺中的一種關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì),中樞神經(jīng)系統(tǒng)中多巴胺的濃度受精神因素的影響,神經(jīng)末梢的G nR H 和多巴胺間存在著軸突聯(lián)系并相互作用,以及多巴胺有抑制G nR H 分泌的作用。

中腦的神經(jīng)原物質(zhì)多巴胺(D opamine) ,則直接影響人們的情緒。從理論上來看,增加這種物質(zhì),就能讓人興奮,但是它會令人上癮。多巴胺在前腦和基底神經(jīng)節(jié)(BasalG anglia) 出現(xiàn),基底神經(jīng)節(jié)負(fù)責(zé)處理恐懼的情緒,但由于多巴胺的緣故,取代了恐懼的感覺,因此有很多人的上癮行為,都是因多巴胺而起的。

方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)T H 免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml) 
培 養(yǎng)  基 :含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁 
細(xì)胞形態(tài) :神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 :屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 :不傳代
消 化  液 :0. 125% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

使用方法
小鼠多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈神經(jīng)元細(xì)胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 靜置后,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),拍照記錄細(xì)胞的貼壁情況,漂浮的細(xì)胞需離心收集后在離心管消化(脫落細(xì)胞處理方式) ,貼壁細(xì)胞也需消化后與脫落的細(xì)胞合并一起后重新接種。
3. 神經(jīng)元細(xì)胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細(xì)胞(1200rpm5min) ,細(xì)胞沉淀按照下面脫落細(xì)胞處理方式處理該部分細(xì)胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞,用PBS(37℃預(yù)熱) 清洗細(xì)胞一次,將PBS收集到步驟1的離心管中,不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,放入4℃冰箱消化細(xì)胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消
化,培養(yǎng)基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞,1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清,加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補(bǔ)加1% FB S,促進(jìn)貼壁) ,接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細(xì)胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
4. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1200rpm 5min離心,保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中,輕柔重懸沉淀,放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ,離心5min,丟棄上清,用5ml完全培養(yǎng)基(可補(bǔ)加1% FBS,促進(jìn)貼壁) 重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對靜置24-48小時(shí), 48小時(shí)后觀察,否則細(xì)胞容易聚團(tuán)。
5. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ (2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/ml),明膠(0. 1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

特殊注意事項(xiàng)
5. 神經(jīng)元細(xì)胞貼壁不牢,必須包被培養(yǎng)器皿。細(xì)胞遇冷易收縮脫落,所用試劑需37℃預(yù)熱,室溫觀察時(shí)間不宜過長。

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