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021-54845833/15800441009
產品簡介
產品名稱 ： 大鼠下丘腦神經元細胞
產品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 腦組織
產品規格 ： 5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
大鼠下丘腦神經元細胞分離自下丘腦；下丘腦又稱丘腦下部，位于大腦腹面、丘腦的下方，是調節內臟活動和內分泌活動的較高級神經中樞所在。下丘腦自前向后可分三部﹐即前部(又名視前區和視上區)﹑中部(結節區)和后部(乳頭體區)。
下丘腦具有許多細胞核團和纖維束﹐與中樞神經系統的其它部位具有密切的相互聯系。它不僅通過神經和血管途徑調節腦垂體前﹑后葉激素的分泌和釋放﹐而且還參與調節自主神經系統﹐如控制水鹽代謝﹑調節體溫﹑攝食﹑睡眠﹑生殖、內臟活動以及情緒等。
下丘腦神經元與來自其他部位的神經纖維有廣泛的突觸聯系，可以接受很多神經沖動，為內分泌系統和神經系統的中心。它們能調節垂體前葉功能，合成神經垂體激素及控制自主神經和植物神經功能。故提取下丘腦神經元進行體外培養，建立下丘腦神經元體外實驗平臺具有重要意義。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠下丘腦神經元細胞采用胰蛋白酶消化法結合神經元專用培養基培養、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠下丘腦神經元細胞經β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ： PLL(0.1m g/ml)
培 養 基 ： 含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態 ： 神經元細胞樣
傳代特性 ： 不傳代
消 化 液 ： 0.125% 胰蛋白酶
培養條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠下丘腦神經元細胞體外培養周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
大鼠下丘腦神經元細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈神經元細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2.靜置后，顯微鏡下觀察細胞狀態，拍照記錄細胞的貼壁情況，漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式)，貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3.神經元細胞消化
1) 將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管，離心收集細胞(1200rpm5min)，細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養瓶內貼壁細胞，用PBS(37℃預熱)清洗細胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，不要直接丟棄。
3) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min )。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化(稀釋法終止消化，培養基用量不低于5ml)。
5)用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養基混勻(可補加1% FB S，促進貼壁)，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板)。
7) 待細胞貼壁后可用于后續相關實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min )。
3) 消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
4) 經1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養基(可補加1% FBS，促進貼壁)重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
5) 接種后絕對靜置24-48小時， 48小時后觀察，否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
