產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 : 大鼠胚胎肝母細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 : 通蔚生物
組織來源 : 胚胎;肝臟
產(chǎn)品規(guī)格 : 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
大鼠胚胎肝母細(xì)胞分離自胚胎肝組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。
肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟起源于腹側(cè)前腸內(nèi)胚層細(xì)胞(一種多潛能干細(xì)胞)。在 ED 8.5的小鼠和 ED 9.5 的大鼠,前腸的原始上皮細(xì)胞接觸心肌中胚層后快速增殖,形成肝原基。大約1d后,原始上皮細(xì)胞侵入原始橫膈,繼續(xù)分化為幼稚肝臟上皮細(xì)胞,這些細(xì)胞先表達(dá) A FP 然后是A Lb。幼稚肝臟上皮細(xì)胞很快成熟,并進(jìn)一步分化為肝細(xì)胞或膽管上皮細(xì)胞,因?yàn)榇似诘母闻K上皮細(xì)胞其具有向這兩種肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞雙向分化的潛能,所以又稱肝母細(xì)胞。
方法簡介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎肝母細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎肝母細(xì)胞經(jīng)PC K 免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 : 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm 2)
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣 傳代特性 可傳2-3代左右
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
大鼠胚胎肝母細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
大鼠胚胎肝母細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳2-3代左右;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1m g/m l),明膠(0.1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。