產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :小鼠主動脈平滑肌細胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :主動脈組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠主動脈平滑肌細胞分離自主動脈組織。主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為:升主動脈起于左心室,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈。在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈,以上為胸主動脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈。
髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中。2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏。細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀。密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。
傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。主動脈平滑肌細胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用,以主動脈平滑肌細胞為實驗研究對象,探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機制是目前研究的熱點。
體外培養(yǎng)的主動脈平滑肌細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠主動脈平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠主動脈平滑肌細胞經(jīng)α-SM A 免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :成纖維細胞樣
傳代特性 :可傳3代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
小鼠主動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠主動脈平滑肌細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈成纖維細胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下,細胞可傳3代左右。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。