兔脊髓神經元細胞
產品簡介
產品名稱 : 兔脊髓神經元細胞
產品品牌 : 通蔚生物
組織來源 : 脊髓組織
產品規格 : 5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
兔脊髓神經元細胞分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經結構,位于脊柱的椎管內且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。
人和脊椎動物中樞神經系統的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發出成對的神經,分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H 形(蝴蝶型)灰質區,主要由神經細胞構成;在灰質區周圍為白質區,主要由有髓神經纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。
脊髓兩旁發出許多成對的神經(稱為脊神經)分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節,31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經系統最基本的結構和功能單位是神經元,即神經細胞,其大小和外觀在中樞神經系統中差異很大。
但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內含神經絲、微管、內質網、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經元突起的粗面內質網可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經元的突起,能在神經元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態各不相同,很難用常規的顯微鏡鑒別。
脊髓組織內含有大量膠質細胞,神經元含量少,分離純化難度大,且脊髓神經元細胞是高度分化的終末細胞,不能分裂增殖,培養要求高。剛接種的脊髓神經元呈圓形,體積小,透亮,無突起。培養2-3d,可見胞體增大,突起增多延長;培養6-7d,細胞體大飽滿,突起明顯增加延長并交織成網,光暈明顯,立體感強。培養20d后,死 亡細胞明顯增加,細胞出現內空泡,突起粗細不均,甚至脫壁,發生細胞崩解。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的兔脊髓神經元細胞采用膠原酶-胰酶聯合消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的兔脊髓神經元細胞經β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 : 含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細胞形態 : 神經元細胞樣
傳代特性 : 屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群
傳代比例 : 不傳代
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培養條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
兔脊髓神經元細胞體外培養周期有限;建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
兔脊髓神經元細胞是一種貼壁細胞,細胞形態呈神經元細胞樣,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態。
2.靜置后,顯微鏡下觀察細胞狀態,拍照記錄細胞的貼壁情況,漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式),貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3.神經元細胞消化
1) 將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm5min),細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養瓶內貼壁細胞,用PBS(37℃預熱)清洗細胞一次,將PBS收集到步驟1的離心管中,
不要直接丟棄。
3) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min )。
4) 倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養基終止消化(稀釋法終止消化,培養基用量不低于5ml)。
5)用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清,加入適量的完全培養基混勻(可補加1% FB S,促進貼壁),接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板)。
7) 待細胞貼壁后可用于后續相關實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1200rpm 5min離心,保留沉淀。
2) 添加0.125% 胰蛋白酶消化液(0.25% 胰酶用PBS稀釋一倍)1m L至離心管中,輕柔重懸沉淀,放置4℃冰箱靜置3-5min )。
3) 消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
4) 經1200rpm ,離心5min,丟棄上清,用5ml完全培養基(可補加1% FBS,促進貼壁)重懸沉淀,接種于新的培養瓶內。
5) 接種后絕對靜置24-48小時, 48小時后觀察,否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ (2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1m g/ml),明膠(0.1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。