產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :視網(wǎng)膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞分離自視網(wǎng)膜組織。視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連,由色素上皮細胞組成,它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為 :色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用。
后部鼻側有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。第一神經(jīng)元是視細胞層,專司感光,它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上,而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節(jié)細胞,約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系,負責聯(lián)絡作用。第三層叫節(jié)細胞層,專管傳導。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構,它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。
視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力最強。視網(wǎng)膜Muller細胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質細胞,大約占視網(wǎng)膜膠質細胞的90% ,因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關注。在超微結構水平上,Muller細胞的胞質似乎比臨近的其他細胞更高的電子密度,更發(fā)達的內(nèi)質網(wǎng),細胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位,Muller細胞形態(tài)也會有所差異的。
視網(wǎng)膜Muller細胞是一種特化的神經(jīng)膠質細胞,不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結構和功能的作用,并調(diào)制視網(wǎng)膜神經(jīng)元活動,還能參與多種病理過程,尤其是眼底增殖性病變,如增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等,體外培養(yǎng)M ulle r細胞是研究這些增殖性病變途徑之一。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞采用膠原酶消化法和胰蛋白酶反復消化法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞經(jīng)G FA P免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :梭形、多角形
傳代特性 :可傳2-3代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
大鼠視網(wǎng)膜Muller細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈梭形、多角形,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。