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品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 人皮層神經(jīng)元細胞

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW32243
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :人皮層神經(jīng)元細胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :腦組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶

細胞簡介
人皮層神經(jīng)元細胞分離自腦皮層組織。皮層神經(jīng)元細胞是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突觸(軸突) 的細胞,它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘,組成神經(jīng)纖維,它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中,細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。

細胞體是細胞含核的部分,其形狀大小有很大差別,直徑約4-120微米。核大而圓,位于細胞中央,染色質(zhì)少,核仁明顯。細胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì),還有許多神經(jīng)元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分,又可分為樹突和軸突。每個神經(jīng)元可以有一或多個樹突,可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經(jīng)元只有一個軸突,可以把興奮從胞體傳送到另一個神經(jīng)元或其他組織,如肌肉或腺體。

皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細胞之一,是大腦進行功能活動調(diào)節(jié)的基本單位,參與動物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開始。突起逐漸增多,而后突起進一步增多并逐漸成網(wǎng),同時細胞胞體增大,周邊光暈明顯。10-12d細胞最為豐滿,隨后神經(jīng)元開始裂解,突起逐漸減少,細胞已退化變性,輪廓模糊,光暈消失,細胞變形。

方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人皮層神經(jīng)元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶 。

質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人皮層神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml) 
培 養(yǎng)  基 :含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 :屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 :不傳代
消 化  液 :0. 125% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
人皮層神經(jīng)元細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

使用方法
人皮層神經(jīng)元細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈神經(jīng)元細胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下,細胞屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 靜置后,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),拍照記錄細胞的貼壁情況,漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式) ,貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3. 神經(jīng)元細胞消化
1) 將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,離心收集細胞(1200rpm5min) ,細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁細胞,用PBS(37℃預(yù)熱) 清洗細胞一次,將PBS收集到步驟1的離心管中,不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化(稀釋法終止消化,培養(yǎng)基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清,加入適量的完全培養(yǎng)基混勻(可補加1% FB S,促進貼壁) ,接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細胞貼壁后可用于后續(xù)相關(guān)實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1200rpm 5min離心,保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中,輕柔重懸沉淀,放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內(nèi)加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
4) 經(jīng)1200rpm ,離心5min,丟棄上清,用5ml完全培養(yǎng)基(可補加1% FBS,促進貼壁) 重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
5) 接種后絕對靜置24-48小時, 48小時后觀察,否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ (2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/ml),明膠(0. 1% ),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

特殊注意事項
5. 神經(jīng)元細胞貼壁不牢,必須包被培養(yǎng)器皿。細胞遇冷易收縮脫落,所用試劑需37℃預(yù)熱,
室溫觀察時間不宜過長。

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