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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：人腎小球內(nèi)皮細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：腎組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人腎小球內(nèi)皮細胞分離自腎組織。腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。
腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltra tion) 的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。
腎小球內(nèi)皮細胞是一類特殊微血管類型的細胞。細胞為圓形、多角形，單層貼壁生長。細胞質(zhì)豐富，細胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細胞被覆于腎小球毛細血管壁腔側(cè)，與血流直接接觸，是腎小球濾過膜的第一道屏障，可粘附細菌和白細胞，修復基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用。所以，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細胞在免疫學和病理生理學領域中具有重要的研究價值。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人腎小球內(nèi)皮細胞采用先機械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105 cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人腎小球內(nèi)皮細胞經(jīng)C D 31免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態(tài) ：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人腎小球內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人腎小球內(nèi)皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內(nèi)皮細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
