其他中文名稱(chēng) : 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶;胸腺五肽
英文名稱(chēng) : TDT
其他英文名稱(chēng) : Terminal Transferase;Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
C A S : 9027-67-2
分子量 : 60000
級(jí) 別 : BR
來(lái) 源 : 大腸桿菌細(xì)胞,含有編碼牛胸腺末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶的基因
濃 度 : 20u/ul
活性定義 : 是指在37℃、60分鐘內(nèi)將1nmol脫氧核糖核酸摻入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量
酶活性分析混合物 : 66mM二甲胂酸鉀(PH7.2),1mM CoCL2, 0.01%(v/v) Triton X-100, 10uM oligo(dT)10, 1mM dTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP
保存液組分 : 100mM 醋酸鉀(PH6.8)、2mM β-巰基乙醇,0.01%(v/v) Triton X-100和50%(v/v)甘油
5×反應(yīng)緩沖液 : 1M 二甲胂酸鉀、125mM Tris,0.05%(v/v) Triton X-100,5mM CoCL2(PH7.2,25℃)
抑制劑 : 金屬螯合劑、銨、氯化物、碘化物和磷酸鹽離子
失 活 : 加入EDTA,70℃加熱10分鐘
質(zhì)量保證 : 測(cè)試表明無(wú)內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
注 意 : 由于含有CoCL2,TdT反應(yīng)緩沖液不能與下游應(yīng)用兼容,需采用柱離心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法純化反應(yīng)混合物,除去CoCL2
性 狀 : 懸浮液,重組酶。末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal transferase, TdT)是一種無(wú)需模板的DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3'羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為T(mén)dT的底物。一般操作是:先在載體上打開(kāi)一單個(gè)位點(diǎn),把它與末端轉(zhuǎn)移酶和某一dNTP(如dATP)一起保溫以使添尾,另一待插入的外源DNA片段則用互補(bǔ)的用同法添dNTP(dTTP)用同法添尾。接著使上述兩種都接上互補(bǔ)單鏈尾的DNA片段彼此退火,使形成一雜合載體來(lái)轉(zhuǎn)化受體菌。雜合載體中的裂隙或切口可被受全菌所修復(fù)。
用 途 : 生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物;DNA的3'末端標(biāo)記
保 存 : -20°C