由于有的臨床實驗室在進行ELISA試劑盒測定時，以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的ELISA試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。
       中檔以上的酶標(biāo)儀基本上都同時具有單波長和雙波長比色功能。所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有大吸收的波長如450nm或492nm進行比色測定；而雙波長雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點，一般不必設(shè)空白孔。
       ELISA試劑盒的比色測定由酶標(biāo)儀進行，有的同行可能會認(rèn)為，既然由酶標(biāo)儀進行，那么此時便可以萬事大吉了，其實不然，因為當(dāng)代較為先進的酶標(biāo)儀器儀表，均有較多的功能，使用不當(dāng)，會得到令人難以理解的結(jié)果。如使用酶標(biāo)儀比色測定后，有許多陰性測定孔的吸光度值為負(fù)數(shù)或測定假陽性率大大增加等等。